治疗白癜风的最好医院 http://pf.39.net/bdfyy/bdfjc/150316/4591440.html从接触细胞学以来，经常在各种场合以及平台分享一些精美的细胞学图片；很多同行朋友经常会有疑问“哇，真漂亮，你是怎么做到的？”；甚至有些朋友会追问“你用的什么牌子的显微镜，什么牌子的染液，什么牌子的玻片乃至什么牌子的手机。”其实，细胞学检查是临床化验中的一项基本功，也属于那种循规蹈矩、熟能生巧的活儿。
图1：犬肥大细胞瘤转移至淋巴结。红细胞背景中可见肥大细胞，嗜酸性粒细胞，浆细胞和淋巴细胞（Diff-Quik染色，x）。
图2：犬骨肉瘤。视野中可见几个多核巨细胞，细胞核表现出明显的异型性，细胞核内可见明显核仁；另可见核塑形（Diff-Quik染色，x）。
图3：犬脂肪瘤。视野中可见大量脂肪细胞（Diff-Quik染色，10x）。
图4：犬淋巴瘤。视野中可见大量淋巴母细胞和淋巴腺小体，偶见有丝分裂像（Diff-Quik染色，x）。
图5：猫注射部位肉瘤。细胞和细胞核可见明显的大小不等；视野左下角可见一多核巨细胞，细胞内含有大小不等的细胞核（Diff-Quik染色，x）。
图6：背景中存在大量的圆形病原结构，这些病原的细胞核位于一侧，另一侧呈现不着染的形态；细胞学符合组织胞浆菌的表现（Diff-Quik染色，x）。
图7：猫骨肉瘤。视野中可见大量纺锤形细胞和嗜酸性基质（Diff-Quik染色，x）。
图8：猫多发性骨髓瘤。视野中存在大量的浆细胞，另可见有丝分裂像和双核细胞（Diff-Quik染色，x）。
以上的这些照片，都是在临床实践中拍摄的，可以这么说，我们在细胞学诊断中所使用的这些设备，可能都医院/诊所所具有的。在与很多的医生交流后，我觉得更多的问题是在样本的采集，制作和判读思路上。以下会详细介绍临床中较为常用的技术：
一．细胞学样本的采集
临床中很多肿块、皮肤病变可以进行采样而获得细胞学样本进行判读，常用的方法包括压片检查，刮片检查，棉签采样，细针抽吸（带抽吸力）和细针活检（不带抽吸力）。对于实质性的团块，作者最常使用是细针抽吸和细针活检。下面会就这两个采样方式进行详细接受。
1.细针抽吸
1.1细针抽吸采样准备
A.具有磨砂边的载玻片，可以进行标记或者贴上标签
B.20G-24G的针头和5-10ML注射器。如果对体内器官，例如肝脏和脾脏进行采样，可能需要更长的针头，特别是在大型犬中。在这种情况下，可以使用脊髓穿刺针。对于一些软组织团块，可以使用更小型号的针头和注射器。
C.铅笔，可用于标注载玻片的日期，采样位置以及病患的名字。
D.75%酒精棉以及干棉
1.2细针抽吸（带抽吸力）方法（视频1）
①使用75%的酒精对采样部位进行消*以后，使用一只手固定团块病灶或者器官，另一只手握持注射器进行穿刺。
②拉动活塞，将其回抽至针管1/2或2/3的位置后保持负压的状态。如果肿块较大，针头可以往各个方向进行穿刺，取得肿块或者器官多个方向的样本。
③释放活塞，使活塞回复到抽吸前的位置后拔出针头。
④将针头从注射器拆下，抽吸少量空气，再将针头连接回注射器，将抽吸的样本轻轻地推压至载玻片上。
视频1：细胞学采样之细针抽吸(该视频由德国纳博科临实验室和陈宇驰医生录制和提供)。
1.3细针活检（不带抽吸力）方法（视频2）
①在注射器中抽吸入占注射器体积2/1-3/4的空气。
②使用75%的酒精对采样部位进行消*以后，使用一只手固定团块病灶或者器官，另一只手如同握笔一样的姿势拿着注射器进针。
③针头可以往各个方向进行穿刺，取得肿块或者器官多个方向的样本。
④拔出针头，将样本推压至载玻片上。
视频2：细胞学采样之细针活检(该视频由德国纳博科临实验室和陈宇驰医生录制和提供)。
1.4细胞学样本收集技巧和建议
A.避免血液污染：对于质地柔软、血管丰富以及较小的病灶使用不带抽吸力的抽吸方式。
B.不要延长抽吸的时间（最好小于30S），抽吸后尽快制作细胞学玻片，使样本得到最好的保存。
C.如果肿块较大，尝试分开2-3次进行抽吸。
D.每次抽吸至少制作2张以上的玻片。
E.如果使用细针抽吸的方式进行抽吸采样，样本中只含有少量的和细胞，建议使用更大的针头和注射器，或者在抽吸时使用更大负压的抽吸力。
F.针头内的样本是通常是足够的，进一步的抽吸可能导致血液污染。
G.使用细针抽吸进行抽吸时，如果注射器内出现血液，停止抽吸的操作，使用新的注射器和针头重新采样。
二．细胞学样本的制备
采集完样本之后放置于玻片之上，之后选择合适的制片方式进行制备。常用的方式包括玻片推拉，血涂片技术，线浓集技术和海星技术。本人最常使用玻片推拉技术和线浓集技术。
1.玻片推拉法（视频3）
①将针头里的样本推压至一张载玻片的中央。
②将第二张载玻片水平或者垂直放置到第一张带有样本的载玻片上，让样本扩散开来。
③平滑并轻柔的拉动第二张载玻片，使样本分布在两张载玻片上。
④在染色前使用铅笔在玻片上标注动物信息和采样信息。
视频3：细胞学样本制备之玻片推拉(该视频由德国纳博科临实验室和陈宇驰医生录制和提供)。
2.线浓集技术
这种方法主要针对液性的样本。液体样本通常来自于体腔渗出、囊肿、关节、脑脊液、血清肿、尿液和各种类型的灌洗液（支气管肺泡灌洗，经气管冲洗）。如果有足够量的液体，将液体分别放置于EDTA抗凝管和无菌的空白管中。采样的时候应该制作抹片。EDTA能够防止液体凝固，因此在需要的时候，能够对液体进行准确的细胞计数。在送检的过程中，EDTA能够维持细胞形态，但是最好的细胞形态在采样时制作的玻片上。特别是在尿液样本中，细胞长时间接触尿液会导致严重的肿胀和退化。采样时制作玻片能够帮助更好地判断某些细胞学特征的重要性，例如吞噬红细胞现象和细胞内细菌的出现（吞噬红细胞和白细胞吞噬细菌都有可能在送检的过程中出现）。EDTA能够抑制细菌的生长，所以通常不建议使用EDTA保存的液体进行培养。同时，将采集的样本放置到无菌的容器中，如果细胞学检查提示有进行培养的必要，可以使用这些样本进行培养。对于清亮或者稍微浓稠一点的液体样本，可以通过离心浓缩以增加玻片制备时细胞的数量。离心后，移出大部分的上层清液，然后将剩下的清液和下层沉淀重新混匀，使用血涂片技术或者线涂片浓集技术进行制片。线涂片浓集技术与血涂片技术相似，在推片至玻片2/3部位时，停止推片，直接向上提起推片，让更多的液体样本聚集在这个部位上，达到细胞浓集的目的（图9）。
图9：细胞学样本制备之线浓集技术
3.细胞学玻片制作的技巧和建议
A.使用有磨砂边的玻片，贴上标签并标注动物的名称，采样位置。
B.在制片的过程中操作要温柔，载玻片本身的重力与液体对载玻片吸力是充足的，不需要更进一步的施加压力。
C.制备完样本后，快速干燥载玻片（使用吹风机或者在空气中自然风干）。
D.如果只是将样本喷涂到在玻片上，这会产生很厚的细胞群落，无法对单个细胞进行细胞学评估。
E.避免将样本制备至玻片的边缘，特别是载玻片短轴的那一边，这些区域很难进行评估。而且，在载玻片制备的过程中，这些区域很有可能被手指表面的鳞屑所污染。
三．细胞学玻片染色
1.染色液的类型
有几种不同类型的染色液可以用于细胞学染色：罗曼诺斯基染色法（瑞氏，吉姆萨和Diff-Quik染色），超活染色法（甲苯胺蓝，新亚甲蓝）和巴氏染色法。巴氏染色法可以染出良好的细胞核以及细胞质细节，但是染色过程很耗时，操作繁琐，不适合在临床中使用。超活染色法能够染出很好的细胞核细节但是细胞质的着染较差，通常用于评估网织红细胞以及少颗粒性的肥大细胞。罗曼诺斯基染色液操作简单，很适合兽医临床的使用。该类型的染液能够染出良好的细胞核以及细胞质细节，病原体也容易表现出来。相比而言，在临床实践中效益最好，最快速以及最容易操作的染色液是Diff-Quik染色液。通常，对于比较薄的细胞学玻片，需要的染色时间较短，对于比较厚的细胞学玻片，染色时间应该相应地延长。
2.染色的技巧和建议
A.密封盛装染色液的容器（例如，在盖子和容器之间使用一层薄膜，特别是A液），可以减少染液由于汽化造成的损耗。
B.在染色前确保玻片完全风干。
C.注意不要染色过度。染色不足可以进行复染，通过延长染色时间增加染色深度。
D.如果在镜检的玻片上经常发现细菌和/或真菌（特别是当采样位置不是表面的溃疡灶时），染液可能已经被污染，需要及时更换。可以使用一张未使用过的干净载玻片进行染色，观察玻片上是否有微生物的存在，证明是否存在染液污染的情况。
E.过多的染料沉淀通常会以蓝色的颗粒成群地出现在细胞上。应该对染液进行混匀或者更换。
F.染液会随着使用时间而降低染色效果，需要定期更换染液。
G.评估细胞学玻片的厚度，染色的深度以及质量，以调整下次染色的时间
参考文献
1.DrBrettStone，DrGeorgeReppas.CytologySampleCollectionandPreparationforVeterinaryPractitioners[Z].
2.AmyC.Valenciano,RickL.Cowell.DiagnosticCytologyAndHematologyOfTheDogandCat[M]4th.ElsevierInc.:1-14
预览时标签不可点收录于合集#个上一篇下一篇
