1、细胞的状态是成瘤实验的关键，所以细胞生长状态一定要好，取处于对数生长期的细胞，细胞达80-90%左右密度为宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
2、胰酶消化细胞后用预冷的PBS洗两遍，目的为去除细胞中的血清。
3、用PBS或者无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度，一般皮下瘤接种的细胞量为1-5×10^6个细胞/支，接种体积为0.1ml，因此细胞悬液的浓度为1-5×10^7个细胞/ml。
4、细胞消化后应尽快接种到裸鼠皮下，一般尽量在半小时内完成，途中将细胞悬液放在冰上降低细胞的代谢。
5、选择的裸鼠一般在5-8周龄，体重18-20g左右，种植部位选择血供丰富区域，如腋窝中后部、腹股沟中上部。
6、接种前用枪将细胞悬液充分的吹散，防止细胞成团而降低细胞成活率。
7、接种时，针头在皮下进针深一点，约1cm深，减少注射后细胞悬液从针眼溢出。
8、如何抓牢裸鼠：左手拇指和食指捏紧裸鼠颈背部皮肤，小拇指夹住裸鼠尾巴。
9、接种后一周左右可以见到皮下开始出现肿块。
10、根据肿瘤细胞的特性和接种细胞的量，一般皮下成瘤的周期为1-2个月。肿瘤不宜生长过大，一般不要超过mm3，肿瘤负荷过大常常会以违背动物伦理而被杂志社刁难。
11、肿瘤大小测量一般为1周两次，游标卡尺测量肿瘤最长和最短部位。V=1/2*a*b2(a为长轴，b为短轴)。
12、皮下瘤取下后一部分冻液氮用作以后提蛋白和RNA，一部分福尔马林固定用做免疫组化、免疫荧光等。
如果需要体内裸鼠成瘤及血管生成实验步骤，欢迎留言康宁双抗促销，就可以获得额。
友情推荐：
拒绝细胞污染，康宁双抗大促销
声明：“细胞之邦”